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猪传染性胃肠炎(transmissiblegastroenteritisofpigs，TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的一种高度接触性消化道传染病。以呕吐、严重腹泻和脱水为主要临床特征，两周龄以内的仔猪感染TGEV后，会表现严重腹泻，病死率高达%（ZhangX等，）。该病最早于年在美国首次报道，目前已成为引起猪群腹泻的重要病原。 一 病原特征 TGEV属于冠状病毒科、冠状病毒属，是一种由囊膜、单股正链RNA病毒，在囊膜上有花瓣状突起。病毒粒子呈圆形或椭圆形，直径约为~nm。整个基因组长28.6kb，共编码4种结构蛋白和3种非结构蛋白。本病毒不耐热，56℃45min或者65℃10min即可被杀死，但在冷冻条件下比较稳定。对一般消毒剂如2%甲醛、2%氢氧化钠、次氯酸等较敏感。二 流行病学 TGEV的传染源至少有四种，第一种是病毒扩散呈亚临床症状的猪场，如育肥猪场或不断有新生仔猪的猪场，TGEV可持续存在于这些猪场，一旦到了发病的适应季节，即可引起本病的爆发。第二种是狗、猫、狐狸、燕八哥、苍蝇等带毒、排毒、机械的传播本病；第三种是带毒猪或发病猪通过鼻内分泌物、粪便、乳汁排毒；第四种是感染了TGEV的动物尸体。其中，猪对TGEV最为易感，各种年龄的猪均可感染。本病的发生和流行有明显的季节性，一般发生在冬季和春初，发病高峰一般在1月份。而且本病常与产毒素大肠杆菌、猪流行性腹泻病毒或轮状病毒发生混合感染，哺乳仔猪和断奶仔猪死亡率较高。三 临床诊断 1.临床症状 本病的潜伏期较短，传播迅速，2～3d可波及整个猪群。临床症状因猪龄大小而异，新生仔猪的典型症状是呕吐、水样腹泻、脱水、体重迅速下降，导致新生仔猪高发病率和高死亡率。泌乳母猪发病，则一过性体温升高，呕吐、腹泻、厌食、无乳或泌乳量急剧减少。生长猪和出栏期猪感染本病时，临床上仅表现厌食，腹泻程度较轻，持续期较短，极少发生死亡，但生长发育受阻。 2.病理变化 主要病变在胃和小肠，卡他性炎症，胃肠充满凝乳块，胃黏膜充血或出血；肠壁弹性下降，管壁变薄，呈透明或半透明状；肠内容物呈泡沫状、黄色、透明；肠系膜淋巴结肿胀；空肠黏膜可见肠绒毛萎缩，哺乳猪肠系膜淋巴管的乳糜管消失。 根据流行病学、临床症状和病理变化可怀疑本病，做出初步诊断，但临床上常常存在混合感染和细菌继发感染而使临床症状复杂化，尤其不能有效地将TGEV与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪轮状病毒（PRV）等区分，确诊还需实验室检测诊断，如病毒分离鉴定、抗原的检测、病毒抗体的检测等诊断方法。随着分子生物学的发展，病毒核酸的检测方法如PCR、核酸杂交探针技术等相继得到应用。 四 实验室检测诊断 （一）检测诊断标准（现行）表1猪传染性胃肠炎检测诊断标准（现行） （二）检测诊断方法1.病原学检测（1）病毒的分离鉴定TEGV可在原代或次代猪肾细胞、猪肾传代细胞系、猪唾液腺原代细胞、猪甲状腺原代细胞以及猪源ST传代细胞上增殖并产生细胞病变。初次分离的野毒株细胞病变不是很明显，需盲传几代后才能出现明显的细胞病变，但在不同的细胞上产生的细胞病变也有一定的差异。一般在ST或甲状腺细胞上的细胞病变具有膨胀的、圆形或长形外观如气球的细胞组成。（2）病毒的电镜检测TGEV感染猪的肠内容物和粪便均可以进行电镜负染，此外，病猪的脾脏、空肠、十二指肠和肠系膜淋巴结均可检测到病毒，且在空肠、十二指肠和肠系膜淋巴结中最高。电镜显示，病毒分布在胞浆的空泡里和微绒毛间隙，在微绒毛间隙的病毒往往呈串球状排列（韩国全等，）。（3）免疫荧光法和免疫氧化物酶法检测感染仔猪的小肠上皮细胞、肠内容物或粪便中检测TGEV。采集病死猪小肠，或腹泻早期扑杀猪的空肠、回肠黏膜涂片，进行直接或间接免疫荧光检测。用抗TGEV单克隆抗体或多克隆抗体双层夹心ELISA检测培养的细胞、采集的粪便及肠内容物中的TGEV。（4）病毒核酸的检测TGE是一种高度接触性传染病，易和PEDV、PRV等混合感染，且临床症状及传播途径类似，增加了临床诊断的难度，可以采用诊断TGEV核酸特性的分子生物学检测技术。如核酸探针杂交技术、聚合酶连反应（PCR）技术等鉴别诊断。PCR技术具有快速、敏感、特异等优点，是目前实验室疫病检测的主要方法。根据TGEVS基因的保守序列设计特异性引物建立的TGEV的RT-PCR检测方法，引物序列见表2，具有较好的检测效果。另外，由于猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒三种疾病的临床症状和病理变化相似，可使用多重RT-PCR和巢式RT-PCR方法，对三种病原进行鉴别诊断，其引物序列见表3，既缩短了检测时间，也提高了检测效率，可用于TGEV感染的诊断和流行病学调查。表2引物序列 表3引物序列 来源：《猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法》GB/T- 荧光定量PCR技术具有敏感性特异性更高、高通量、实时定量等优点，在大规模样品检测和流行病学调查中有着较高的优势。综合应用多重RT-PCR和荧光RT-PCR技术，建立的多重荧光RT-PCR检测方法，同样能够检测多种病毒或细菌引起的腹泻疾病，且特异性和敏感性更好，并有很好的重复性。Vemulapalli等通过对TGEV的S基因进行序列对比，设计出特异性引物并引入绿色荧光蛋白作为内参，建立的TapMan荧光定量RT-PCR技术，可用于粪便样品检测，灵敏度可达2.8个拷贝，可与其他猪呼吸道冠状病毒鉴别诊断。龚双燕等建立的SYBRGreenⅡqRT-PCR检测方法可用于提高初乳中TGEV检出率，更加适用于病毒微量的样品检测。近期研究报道，以TGEV的N基因为靶基因，利用双启动寡核苷酸引物（DPO），建立了检测TGEV的qRT-PCR方法，有良好的检测特异性和重复性，组间结果的变异系数小于1.00%，为TGEV的准确检测和流行病学调查奠定了基础。2.血清学检测血清学检测方法，主要包括间接荧光抗体试验、间接免疫过氧化物酶试验、放射免疫沉淀试验、病毒中和试验等。周仲芳等采用杆状病毒表达系统生产的TGEV-S蛋白建立了一种竞争ELISA检测猪TGE血清抗体的方法，之后利用抗原重组有建立了间接ELISA，可以进行TGEV的早期快速诊断，临床应用性较强。中科基因猪传染性胃肠炎病毒检测能力 由于临床上造成仔猪腹泻的病毒病和细菌病症状相似，难以通过肉眼和经验对其进行区分，这时就需要借助实验室分子生物学检测手段鉴别诊断，对症下药，才能起到良好的防治效果。中科基因能采用多种方法进行TGE病原或抗体检测，灵敏、快速。中科基因将传统的检测方法与新型的分子生物学检测方法结合起来，取得了比较满意的效果。表4中科基因猪传染性胃肠炎病毒检测能力参照标准： 1.NY/T-《猪传染性胃肠炎诊断技术》 2.NY/T-（巢式PCR）《猪传染性胃肠炎病毒RT-nPCR检测方法》 3.GB/T-《猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法》 4.ZhangX,ShiHY,ChenJF,etal.Identificationofcellularproteomeusingtwo-dimensionaldifferencegelelectrophoresisinSTcellsinfectedwithtransmissiblegastroenteritiscoronavirus[J].ProteomeScience,,11(1):31-31. 5.韩国全,郭万柱,李云云等.猪传染性胃肠炎病毒检测技术研究进展.猪业科学,,12:33-38. 6.孙伟,刘杉杉,周佳等.猪胃肠炎诊断技术研究进展.中国动物保健,,09:56-59. 7.VemulapalliR,GulaniJ,SantrichC.Areal-timeTaqManRT-PCRassaywithaninternalamplificationcontrolforrapiddetectionoftransmissiblegastroenteritisvirusinswinefecalsamples[J].JournalofVirologicalMethods,,(1):-. 8.龚双燕,李小璟,李幽幽,等.猪传染性胃肠炎病毒SYBRGreenⅡ荧光定量PCR检测方法的建立及在初乳检测上的应用[J].江苏农业学报,,33(5):-. 9.王以欣,王紫薇,王丽等.基于DPO引物检测猪传染性胃肠炎病毒realＧtimeRT-PCR方法的建立及应用.中国兽医学报,,39(8):-. “中科名兽医”APP下载方式： 在应用商店或AppStore搜索“中科名兽医”APP，并下载； 快：线上下单送检、疫病线上诊断、专家快速答疑 全：各地今日猪价、精品视频课程、汇集行业资讯… 预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇 |
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